Bộ phim xoay quanh sự xuất hiện của một nhân vật bí ẩn mới mang tên Batwoman. Trong khi Batman và Commissioner Gordon phải đối mặt với một tổ chức tội phạm đang lớn mạnh dưới sự lãnh đạo của Ras al Ghul và Bane, Batwoman xuất hiện với những phương pháp và mục tiêu của riêng mình. Người hùng mới này không chỉ làm rối loạn hoạt động của Batman mà còn khiến anh nghi ngờ về danh tính thực sự của cô. Cuộc điều tra dẫn Batman đến ba nhân vật khả nghi: Katherine "Kate" Kane, một nhà phát triển bất động sản; Tiffany "Tiff" McKeller, một cựu nữ vận động viên; và Cathy, một nữ nhân viên của Bruce Wayne. Khi Batwoman bắt đầu tấn công các mục tiêu liên quan đến tổ chức tội phạm, Batman phải tìm cách xác định danh tính thật của cô trước khi cô gây ra những thiệt hại không thể sửa chữa.